原位雜交技術(shù)服務(wù)

簡要描述：原位雜交指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。上海伊萊博于臨床前藥效學CRO實驗，有著多年的原位雜交技術(shù)服務(wù)的經(jīng)驗

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原位雜交實驗步驟

原位雜交天進行重新水化和固定、預雜交、雜交。

原位雜交第二天進行1將探針回收，放千-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)2加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1號

升，60℃，放置30分鐘，重復一次。3置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。4置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘

重復一次。5用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。6室溫下加1ml1:2:7溶液，時間為一小時。 7 按1:

3000的比例在1∶2:7溶液中加入酶連地高XIN抗體，4C 冰箱過夜。

原位雜交第三天進行1)用1ml含10%熱滅活血清的MABT溶液置換抗體溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mIMABT置換

25分鐘，再用1mIMABT溶液置換，一小時以上，用1mlMABT溶液置換，25分鐘。2)用1ml 1mM**米唑的Stainino

buffer洗一次，每次放置五分鐘。3)將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer.加上300ulBM Purple AP Substrate(底

物，用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上錫箔紙以避光,避免搖動,室溫下顯色。4)每隔一小時觀察胚胎是否開

始顯色5)將顯色的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4%多聚.甲醛固定，拍照。6)4C冰箱保存。

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