
簡要描述:β-半乳糖苷酶是一種常用的報告基因分子,通過原位染色,在普通的光學顯微鏡下就可以用于檢測到β-半乳糖苷酶的表達。
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實驗步驟:
1.用 2 mL D-PBSA液洗滌細胞。
2.用 1 mL 固定液于室溫下固定細胞 5 min。
3.用 2 mL D-PBSA洗滌細胞 2次。
4.將1mL 底物/染色液加入到每個培養(yǎng)子內(nèi) ,37℃孵音2h.
5.用 2 mL D-PBSA液沖洗每孔細胞,在倒置顯微鏡下觀察細胞,計數(shù)藍染( β-gal 陽性)細胞。
6.培養(yǎng)板的儲存。在每孔加 1 mL 含 10%甲醛的緩沖鹽溶液,室溫下固定 10 min,然后用緩沖鹽溶液洗滌細胞,4℃ 儲存緩沖鹽溶液。
衰老細胞:胞質呈藍綠色 / 深藍色
正常細胞:基本不著色
細胞爬片
組織冰凍切片(少數(shù)情況)
PBS 洗滌
固定液固定 10–15 min
PBS 洗凈
加入染色工作液(含 X-Gal)
37℃ 恒溫孵育過夜(12–16 h)
PBS 洗滌,顯微鏡觀察拍照
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