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實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)

簡(jiǎn)要描述：實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)。實(shí)時(shí)定量PCR是指在PCR指數(shù)擴(kuò)增期間通過(guò)連續(xù)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)弱的變化來(lái)即時(shí)測(cè)定特異性產(chǎn)物的量，并據(jù)此推斷目的基因的初始量，不需要取出PCR產(chǎn)物進(jìn)行分離。

  • 更新時(shí)間：2026-03-20
  • 廠(chǎng)商性質(zhì)：代理商
  • 訪(fǎng)  問(wèn)  量：1587

詳細(xì)介紹

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一、核心流程（標(biāo)準(zhǔn) 4 步法）

  1. 總 RNA 提取
    Trizol 法或試劑盒，測(cè)濃度與純度

    • OD260/280：1.8–2.1 合格

  2. 反轉(zhuǎn)錄（cDNA 合成）
    RNA → 反轉(zhuǎn)錄酶 → cDNA
  3. qPCR 擴(kuò)增
    常用體系：

    • 2×SYBR Green Mix

    • 上游引物 + 下游引物

    • cDNA 模板

    • 補(bǔ)水至 20 μL

反應(yīng)程序：

  • 95℃ 30s

  • 95℃ 5s → 60℃ 30s，40 個(gè)循環(huán)

  • 熔解曲線(xiàn)

  1. 數(shù)據(jù)分析

    2?^ΔΔCt 法

    內(nèi)參基因：β-actin、GAPDH、18S

二、結(jié)果怎么表達(dá)

  • mRNA 相對(duì)表達(dá)量

  • 目的基因 / 內(nèi)參基因

  • 以對(duì)照組為 1 進(jìn)行歸一化

四、常用的基因分

  • 炎癥：TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1

  • 纖維化：TGF-β1、α-SMA、Col1A1、FN

  • 凋亡：Bax、Bcl-2、Caspase3

  • 氧化應(yīng)激：Nrf2、HO-1、NQO1

  • 干性標(biāo)志物：Nestin、SOX2、Oct4

  • 腎損傷：KIM-1、NGAL



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