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軟瓊脂克隆形成服務(wù)

簡(jiǎn)要描述：軟瓊脂克隆形成服務(wù):克隆形成率反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。

  • 更新時(shí)間：2026-03-20
  • 廠商性質(zhì)：代理商
  • 訪  問(wèn)  量：1344

詳細(xì)介紹

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一、原理

兩層瓊脂體系：

  • 底層瓊脂：起支撐作用

  • 上層瓊脂：細(xì)胞懸浮其中，無(wú)法貼壁

    只有惡性程度高 / 腫瘤干細(xì)胞樣的細(xì)胞能在懸浮狀態(tài)下增殖形成肉眼可見(jiàn)的克隆。

二、材料

  • 2× 培養(yǎng)基（含 20% FBS）

  • 1.2% 低熔點(diǎn)瓊脂糖（底層）

  • 0.7% 低熔點(diǎn)瓊脂糖（上層）

  • 6 孔板

三、標(biāo)準(zhǔn)步驟（常用體系）

1. 鋪底層膠

  • 1.2% 瓊脂: 2× 培養(yǎng)基 = 1:1混合（終濃度 0.6%）

  • 每孔加 2 mL，室溫凝固

2. 鋪上層膠（含細(xì)胞）

  • 0.7% 瓊脂: 2× 培養(yǎng)基 = 1:1混合（終濃度 0.35%）

  • 加入細(xì)胞懸液，混勻

  • 細(xì)胞密度：1×103~1×10? / 孔

  • 每孔加 1~1.5 mL，室溫凝固

3. 培養(yǎng)

  • 37℃、5% CO? 培養(yǎng) 14~21 天

  • 每 3～4 天滴加少量培養(yǎng)基保濕

4. 染色與計(jì)數(shù)

  • PBS 輕洗

  • 結(jié)晶紫或 MTT 染色

  • 顯微鏡下計(jì)數(shù)直徑＞50~100 μm的克隆數(shù)

四、結(jié)果判斷

  • 克隆數(shù)越多、體積越大 → 惡性程度 / 成瘤能力越強(qiáng)

  • 給藥組克隆數(shù)減少 → 抑制惡性表型





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