小腸類器官

一、核心定義與特征

1. 細胞譜系完整：包含吸收性腸上皮細胞、杯狀細胞、潘氏細胞、腸內(nèi)分泌細胞及持續(xù)增殖的 Lgr5?干細胞；

2. 極性與結(jié)構(gòu)：形成囊狀 / 隱窩 - 絨毛樣結(jié)構(gòu)，上皮頂端朝向管腔，基底側(cè)貼附基質(zhì)；

3. 功能齊全：具備營養(yǎng)吸收、黏液分泌、消化酶表達、藥物代謝、屏障功能；

4. 穩(wěn)定：可連續(xù)傳代、凍存復蘇，維持數(shù)月功能，保留供體遺傳背景。

二、主流構(gòu)建方法與關鍵流程

1. 成體隱窩 / 干細胞來源（經(jīng)典、快，Clever 團隊 2009 年）

1. 樣本處理：手術 / 活檢小腸組織，4℃ PBS 清洗，刮除黏膜黏液，剪碎至 1 mm3；

2. 隱窩分離：EDTA / 膠原酶消化，冰上孵育分離隱窩，過濾后離心富集；

3. 包埋培養(yǎng)：Matrigel 包埋，滴成穹頂狀聚合；培養(yǎng)基核心因子：Wnt3a、R-spondin1、EGF、Noggin（WENR）；人源常需額外加 TGF-β 抑制劑（A83-01）、p38 抑制劑；

4. 成模與傳代：7 天左右形成囊狀類器官，機械 / 酶解傳代（每 7–10 天一次）。

• 特點：成?？臁⒓兌雀?、適合腸道疾病與感染模型；小鼠體系成熟，人源需精細調(diào)控。

2. iPSC/ESC 分化來源（無限供源、基因編輯友好）

• 路線：iPSC→內(nèi)胚層（Activin A）→后腸（FGF4+Wnt3a）→腸管→小腸類器官；

• 關鍵因子：BMP4、RA（視huang酸）定向小腸分化；后續(xù)加入 WENR 維持；

• 特點：可用于遺傳性腸?。ㄈ缒倚岳w維化）、基因修復研究，無倫理限制，但分化周期長（4–6 周）。

3. 進階共培養(yǎng)體系

• 多細胞組裝：加入成纖維細胞、內(nèi)皮細胞、免疫細胞（如巨噬細胞、T 細胞），構(gòu)建血管化 / 免疫健全的類器官；

• 氣液界面 / 微流控培養(yǎng)：提升成熟度，增強屏障功能與絨毛分化，更適合藥物轉(zhuǎn)運與屏障損傷模型。