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免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)服務(wù)

簡(jiǎn)要描述：免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)服務(wù):是一種利用抗原抗體相互作用的免疫學(xué)原理來(lái)研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法，它可以確定兩種蛋白在完整細(xì)胞內(nèi)生理?xiàng)l件下是否存在相互作用。

  • 更新時(shí)間：2026-03-20
  • 廠商性質(zhì)：代理商
  • 訪  問(wèn)  量：2078

詳細(xì)介紹

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一、原理

用目標(biāo)蛋白的抗體把蛋白從細(xì)胞裂解液里 “拉下來(lái)"，
如果另一個(gè)蛋白和它在體內(nèi)結(jié)合，就會(huì)被一起沉淀下來(lái)，
用 Western blot 檢測(cè)是否存在，證明兩者相互作用。

二、核心用途

  • 證明兩個(gè)蛋白直接 / 間接結(jié)合

  • 驗(yàn)證信號(hào)通路中蛋白復(fù)合物形成

  • 驗(yàn)證藥物是否破壞蛋白相互作用

  • 檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子與伴侶蛋白結(jié)合

三、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)流程（通用版）

  1. 細(xì)胞裂解
    用溫和非變性裂解液（含蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑）
    冰上裂解 30 min，離心取上清
  2. 預(yù)清除
    加入 Protein A/G 磁珠 / 瓊脂糖珠
    4℃輕搖 1 h，減少非特異性吸附
  3. 免疫沉淀（IP）
    加入目標(biāo)蛋白一抗（或 IgG 陰性對(duì)照）
    4℃ 輕搖過(guò)夜孵育
  4. 結(jié)合磁珠
    加入 Protein A/G 磁珠
    4℃ 輕搖 2–4 h
  5. 洗滌
    洗滌液洗 3–4 次，去除雜蛋白
  6. 洗脫與 Western blot
    上樣緩沖液煮沸洗脫
    跑膠 → 轉(zhuǎn)膜 → 孵育另一個(gè)蛋白的抗體檢測(cè)

四、結(jié)果怎么看

  • IgG 對(duì)照組無(wú)條帶

  • IP 組出現(xiàn)目的條帶 → 兩蛋白存在相互作用

  • 給藥后條帶變淺 → 藥物抑制結(jié)合


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