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免疫共沉淀CO-IP實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

簡(jiǎn)要描述：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）是研究蛋白-蛋白間相互作用的經(jīng)典方法，屬于免疫沉淀技術(shù)的一類，常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中未知蛋白組分。免疫共沉淀的設(shè)計(jì)理念是，假設(shè)一種已知蛋白是某個(gè)大的蛋白復(fù)合物的組成成員，那么利用這種蛋白的特異性抗體，就可能將整個(gè)蛋白復(fù)合物從溶液中“拉"下來（常說的“pull-down"），進(jìn)而可以用于鑒定這個(gè)蛋白復(fù)合物中的其他未知成員

  • 更新時(shí)間：2026-03-20
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一、實(shí)驗(yàn)原理

利用特異性抗體將目標(biāo)蛋白（誘餌蛋白）從總蛋白中 “拉下來"，
與其 ** 結(jié)合的目的蛋白（獵物蛋白）** 會(huì)被共同沉淀，再用 WB 檢測(cè)。

二、試劑與耗材

  • 溫和裂解液（NP-40 或 RIPA 低濃度，不能用高 SDS）

  • 蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑

  • Protein A/G 瓊脂糖珠 / 磁珠

  • 一抗（IgG 同型對(duì)照）

  • 電泳、轉(zhuǎn)膜、WB 全套試劑

三、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)步驟（通用版）

1. 蛋白提?。睾土呀猓?/h3>

  • 細(xì)胞 / 組織冰上裂解 30 min

  • 裂解液用 NP-40 體系，避免強(qiáng)變性劑

  • 4℃ 12000 rpm 離心 15 min，取上清

  • BCA 定量，統(tǒng)一蛋白量（常用 1–2 mg/IP）

2. 預(yù)清除（減少非特異性結(jié)合）

  • 加入 Protein A/G 珠子

  • 4℃ 孵育 30–60 min

  • 離心去珠子，取上清

3. 免疫沉淀（核心步驟）

  • 分組：

    • 實(shí)驗(yàn)組：目標(biāo)蛋白一抗

    • 對(duì)照組：IgG 同型對(duì)照

  • 4℃ 緩慢旋轉(zhuǎn)孵育 過夜（4–12 h）

4. 結(jié)合珠子

  • 加入 Protein A/G 珠子

  • 4℃ 孵育 2–4 h

5. 洗滌（關(guān)鍵，去雜蛋白）

  • 低滲洗滌液洗 3–4 次

  • 每次 5 min，4℃ 旋轉(zhuǎn)

  • 棄盡上清

6. 蛋白洗脫與變性

  • 加入 2× 上樣緩沖液

  • 煮沸 5–10 min

  • 離心取上清，上樣跑膠

7. WB 檢測(cè)互作蛋白

  • 跑膠 → 轉(zhuǎn)膜 → 封閉 → 一抗二抗 → 顯影

  • 檢測(cè)：誘餌蛋白 + 互作蛋白


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