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過表達慢病毒構(gòu)建及包裝實驗:慢病毒(Lentivirus)載體是以 HIV-1 (人類免疫缺陷1型病毒)為基礎發(fā)展起來的基因治療載體。具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細胞、長期穩(wěn)定表達外源基因等優(yōu)點,因此成為導入外源基因的有力工具?,F(xiàn)在慢病毒系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛應用到各種細胞系的基因過表達、RNA干擾、microRNA研究以及活體動物實驗中。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 將質(zhì)粒 DNA 導入細菌的過程稱為轉(zhuǎn)化( Transformation )。此感受態(tài)細菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀(感受態(tài)細菌的制備,見前)。質(zhì)粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復合物黏附于細菌表面,經(jīng) 42℃ 短時間熱沖擊處理,促進細胞吸收 DNA 復合物。在豐富培養(yǎng)基上生長數(shù)小時后,球狀細胞復原并分lie增殖。
酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術,由Eva Engvall和 Peter Perlmann 于1971 sc描述。該測定依賴于抗原-抗體相互作用的原理,并利用酶和比色檢測來量化目標分子,主要用于檢測和量化生物樣品中特定蛋白質(zhì)、肽、抗體或抗原的存在。ELISA測定通常應用于各個領域,包括臨床
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是研究蛋白-蛋白間相互作用的經(jīng)典方法,屬于免疫沉淀技術的一類,常被用于鑒定特定蛋白復合物的中未知蛋白組分。免疫共沉淀的設計理念是,假設一種已知蛋白是某個大的蛋白復合物的組成成員,那么利用這種蛋白的特異性抗體,就可能將整個蛋白復合物從溶液中“拉”下來(常說的“pull-down”),進而可以用于鑒定這個蛋白復合物中的其他未知成員

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